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      PCR實(shí)驗(yàn)室工作中需要注意哪些問題?

       更新時(shí)間:2020-05-20    點(diǎn)擊量:5815

      PCR實(shí)驗(yàn)室是分子診斷的基礎(chǔ),也是進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)的*場(chǎng)所。近些年,分子診斷行業(yè)快速發(fā)展,使得很多IVD從業(yè)者對(duì)PCR的認(rèn)識(shí)又進(jìn)入到了一個(gè)新的階段,但是基于實(shí)驗(yàn)室的基本知識(shí)仍然是非常重要的一環(huán)。

      PCR實(shí)驗(yàn)室工作中的注意事項(xiàng)


      (一)試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)

      貯存試劑和用于標(biāo)本制備的消耗品等材料應(yīng)當(dāng)直接運(yùn)送至試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū),不能經(jīng)過擴(kuò)增檢測(cè)區(qū),試劑盒中的陽(yáng)性對(duì)照品及質(zhì)控品不應(yīng)當(dāng)保存在該區(qū),應(yīng)當(dāng)保存在標(biāo)本處理區(qū)。  

      (二)標(biāo)本制備區(qū)

      由于在樣本混合、核酸純化過程中可能會(huì)發(fā)生氣溶膠所致的污染,可通過在本區(qū)內(nèi)設(shè)立正壓條件,避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。為避免樣本間的交叉污染,加入待測(cè)核酸后,必須蓋好含反應(yīng)混合液的反應(yīng)管。對(duì)具有潛在傳染危險(xiǎn)性的材料,必須在生物柜內(nèi)開蓋,并有明確的樣本處理和滅活程序。

      (三)擴(kuò)增區(qū)

      為避免氣溶膠所致的污染,應(yīng)當(dāng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的走動(dòng)。必須注意的是,所有經(jīng)過檢測(cè)的反應(yīng)管不得在此區(qū)域打開。

      (四)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)

      核酸擴(kuò)增后產(chǎn)物的分析方法多種多樣,如膜上或微孔板或芯片上探針雜交方法(放射性核素標(biāo)記或非放射性核素標(biāo)記)、直接或酶切后瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳、Southern轉(zhuǎn)移、核酸測(cè)序方法、質(zhì)譜分析等。

      本區(qū)是主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來源,因此必須注意避免通過本區(qū)的物品及工作服將擴(kuò)增產(chǎn)物帶出。在使用PCR-ELISA方法檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物時(shí),必須使用洗板機(jī)洗板,廢液必須收集至1 mol/L HCl中,并且不能在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)傾倒,而應(yīng)當(dāng)至遠(yuǎn)離PCR實(shí)驗(yàn)室的地方棄掉。

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