PCR實(shí)驗(yàn)室工作中需要注意哪些問題？

PCR實(shí)驗(yàn)室是分子診斷的基礎(chǔ)，也是進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)的*場所。近些年，分子診斷行業(yè)快速發(fā)展，使得很多IVD從業(yè)者對PCR的認(rèn)識又進(jìn)入到了一個(gè)新的階段，但是基于實(shí)驗(yàn)室的基本知識仍然是非常重要的一環(huán)。

PCR實(shí)驗(yàn)室工作中的注意事項(xiàng)

(一)試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)

貯存試劑和用于標(biāo)本制備的消耗品等材料應(yīng)當(dāng)直接運(yùn)送至試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)，不能經(jīng)過擴(kuò)增檢測區(qū)，試劑盒中的陽性對照品及質(zhì)控品不應(yīng)當(dāng)保存在該區(qū)，應(yīng)當(dāng)保存在標(biāo)本處理區(qū)。  

(二)標(biāo)本制備區(qū)

由于在樣本混合、核酸純化過程中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染，可通過在本區(qū)內(nèi)設(shè)立正壓條件，避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。為避免樣本間的交叉污染，加入待測核酸后，必須蓋好含反應(yīng)混合液的反應(yīng)管。對具有潛在傳染危險(xiǎn)性的材料，必須在生物柜內(nèi)開蓋，并有明確的樣本處理和滅活程序。

(三)擴(kuò)增區(qū)

為避免氣溶膠所致的污染，應(yīng)當(dāng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的走動。必須注意的是，所有經(jīng)過檢測的反應(yīng)管不得在此區(qū)域打開。

(四)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)

核酸擴(kuò)增后產(chǎn)物的分析方法多種多樣，如膜上或微孔板或芯片上探針雜交方法（放射性核素標(biāo)記或非放射性核素標(biāo)記）、直接或酶切后瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳、Southern轉(zhuǎn)移、核酸測序方法、質(zhì)譜分析等。

本區(qū)是主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來源，因此必須注意避免通過本區(qū)的物品及工作服將擴(kuò)增產(chǎn)物帶出。在使用PCR-ELISA方法檢測擴(kuò)增產(chǎn)物時(shí)，必須使用洗板機(jī)洗板，廢液必須收集至1 mol/L HCl中，并且不能在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)傾倒，而應(yīng)當(dāng)至遠(yuǎn)離PCR實(shí)驗(yàn)室的地方棄掉。